用什么光源激發(fā)gfp熒光蛋白内舟？

用什么光源激發(fā)熒光蛋白?

LUYOR-3415RG熒光蛋白定位激發(fā)光源可與熒光蛋白觀察鏡luv-50A或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）或黃色熒光蛋白（YFP）。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-50A共同使用蒜魄，可在動物設備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）扔亥。兩個握桿之間的空間可容納小動物的籠子（如小鼠）。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電谈为，可與觀察鏡luv-50A 或 luv-60A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白（GFP）或黃色熒光蛋白（YFP）旅挤。

綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)

 綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein伞鲫，GFP)是一類存在于腔腸動物體內的生物發(fā)光蛋白粘茄。GFP具有多種優(yōu)點：易于檢測，靈敏度高秕脓；熒光性質穩(wěn)定柒瓣，耐受性強；易于表達撒会，無細胞毒性嘹朗；可用于活細胞檢測师妙。因此诵肛，GFP可作為報告基因用于檢測基因表達或調控，或作為融合標簽來檢測蛋白質分子的定位默穴、遷移怔檩、構象變化以及分子間的相互作用，或者靶向標記某些細胞器蓄诽。

GFP吸收的光譜zui大峰值為395nm（紫外）薛训，并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發(fā)射光譜zui大峰值為509nm（綠光）仑氛，并帶有峰值為540nm的側峰（Shouder）乙埃。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發(fā)光對細胞的傷害更小锯岖，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）介袜。此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似出吹，兩者通常共有一套濾光片遇伞。GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下捶牢，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強鸠珠，特別是在450～490nm藍光波長下更穩(wěn)定巍耗。

類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高渐排，抗光漂白能力強炬太，因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物驯耻，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白娄琉，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶吓歇，熒光信號沒有酶學放大效果孽水，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等城看。

觀察GFP熒光蛋白方法有：

1.便攜式GFP激發(fā)光源：

采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡）是zui便捷女气、zui方便的觀察方法，因GFP在470nm有一個很高的吸收峰测柠，采用  470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光炼鞠，在觀察gfp熒光時，因為激發(fā)光為強烈的藍色光線轰胁，必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號谒主。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源。

上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果

2. 紫外光源：

采用紫外光源（又叫紫外線燈赃阀、黑光燈）觀察也非常方便霎肯，但如果觀察植物，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光榛斯，對gfp發(fā)出的熒光也會產生干擾观游，另外，標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞驮俗。

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外懂缕、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。通過定點觀察GFP王凑，可有利于學習如何操縱和提高有用的染色體特性搪柑，從而可以篩選出高基因表達的植物。

 LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應用：

1索烹、 野外工碾、實驗室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。
2术荤、 應用于轉基因作物研究倚喂。
3、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體。
4端圈、 用于基因表達的研究焦读。
5、 用于Rhodamine（紅色熒光染料）舱权、葉綠素矗晃、熒光素的研究。

以上部分內容來自http://www.luyor.net/app/app202.html 

GFP觀察常見問題：

1.動物植物里面表達GFP如何觀察和拍照宴倍？

首先要選擇光線比較暗的環(huán)境张症，佩戴路陽LUV-90P觀察眼罩，采用美國路陽熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410RB照射要觀察的植株鸵贬，GFP表達位置即可清晰呈現(xiàn)俗他。

2.觀察到的GFP表達位置如何拍照？

要拍照植物GFP表達的位置阔逼，首先要有一臺單反相機兆衅，安裝美國路陽LUV-520植物拍照濾鏡，美國路陽LUV-520濾鏡是62mm嗜浮，如果您的單反相機鏡頭不是62mm羡亩，可在市場上購買濾鏡安裝轉換卡，也可直接找美國路陽中國服務中心免費索取危融，用LUYOR-3410RB熒光蛋白觀察鏡照射植物畏铆，用裝有LUV-520濾鏡的單反相機直接拍照就行了，切記要關閉照相機閃光功能吉殃。

3.紅色熒光蛋白如何觀察和拍照辞居？

首先要選擇光線比較暗的環(huán)境，佩戴路陽LUV-50觀察眼罩寨腔，采用美國路陽便攜式熒光蛋白觀察鏡LUYOR-3410GR照射要觀察的植株速侈，GFP表達位置即可清晰呈現(xiàn)。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位迫卢？

4. 用LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡需要把植物葉片采下來觀察嗎？

LUYOR-3410RB便攜式熒光蛋白觀察鏡內置有充電電池冶共，即開即用乾蛤，可以直接帶入到試驗田里面觀察， 無需采摘葉片捅僵，如果試驗田光線太亮家卖，需要做隔光處理。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位庙楚？

5. LUV-520拍照濾鏡可以用于其他廠家的激發(fā)光源嗎上荡？

凡是能激發(fā)GFP熒光的熒光蛋白觀察鏡， LUV-520拍照濾鏡均能夠滿足，可以單獨購買LUV-520拍照濾鏡酪捡。

熒光蛋白觀察鏡如何觀察GFP定位叁征？

6.  365nm、450nm逛薇、488nm 用哪個波段zui好捺疼？

GFP和egfp用這幾個波段都能激發(fā)出熒光，365nm激發(fā)的比較弱永罚，488nm激發(fā)的熒光zui強啤呼，但488nm的激發(fā)波長太接近發(fā)射波長520nm，激發(fā)光和發(fā)射光距離太近對觀察眼鏡要求太高呢袱，觀察眼鏡很難把發(fā)射光隔離掉官扣，會嚴重干擾發(fā)射的熒光。所以用450nm的激發(fā)光是zui理想的羞福。

7.  365nm的紫外光源照射植物葉片為什么是紅色和黃色醇锚？

365nm的紫外光源照射植物葉片，葉片的葉綠素在紫外線作用下會發(fā)紅光坯临，GFP發(fā)出的是綠色的熒光焊唬，紅色和綠色混在一起，會變成黃色看靠，赶促，用紫外光源照射葉片上黃色部位有可能就是GFP表達的位置。

8.  為什么觀察眼鏡和拍照濾鏡價格這么貴挟炬？

因為這種眼鏡和濾鏡的鏡片對波段的截止要求特別高鸥滨，不允有任何激發(fā)光通過，鏡片表面經過了60多層涂層處理谤祖，制造工藝特別復雜婿滓。

9.  觀察眼鏡和拍照濾鏡如何保養(yǎng)？

觀察眼鏡和拍照濾鏡的鏡片經過了60多層涂層處理粥喜，不用時請放置好凸主，表面有灰塵請用柔軟的鏡頭布蘸中性洗滌劑擦洗.

10. LUYOR-3415rg熒光蛋白觀察鏡主要有哪些應用？

1.檢測轉綠色熒光蛋白（GFP）基因额湘、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻卿吐、小麥、玉米锋华、大豆嗡官、棉花、擬南芥等毯焕；
2.檢測轉GFP衍腥、DsRed基因動物：小鼠、兔子、猴子等婆咸；
3.檢測轉GFP竹捉、DsRed基因微生物：細菌、真菌擅耽、酵母等活孩；
4.檢測GFP、DsRed基因組織特異性表達

11.在哪里可以買到美國路陽的便攜式熒光蛋白觀察鏡乖仇？

美國路陽在上海設立有中國客戶服務中心憾儒，提供路陽產品的銷售維修服務。上海乃沙、北京起趾、鄭州均可免費上門演示，美國路陽對中國地區(qū)的客戶提供3年免費維修服務警儒，中國地區(qū)免費請根據網頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系：4006-254-365

如何選擇熒光蛋白激發(fā)波長（GFP训裆，F(xiàn)ITC，RFP ......）蜀铲？

LUYOR提供五種不同的熒光蛋白激發(fā)波長光源边琉，配有經濟型體視顯微鏡熒光適配器和便攜式雙熒光蛋白激發(fā)光源。這些可用于激發(fā)多種熒光團记劝。此頁面提供有關為您的應用選擇正確波長組的指導变姨。
表 1列出了LUYOR波長組，包括激發(fā)范圍的zui強烈部分和成對發(fā)射濾光片的截止值厌丑。
表2  列出了我們推薦用于各種熒光蛋白和染料的波長組定欧。如果您沒有在列表中看到您的熒光團，請告訴我們怒竿，我們將添加它砍鸠。如果您發(fā)現(xiàn)任何錯誤或可以根據您的個人經驗驗證效果，請同時告訴我們耕驰。

我們的建議基于熒光團的工作知識 - 我們自己或客戶的反饋 - 或已公布的光譜數據爷辱。

表一：熒光蛋白的波長組

熒光蛋白和熒光物質的激發(fā)波長的選擇

我公司生產多款便攜式熒光蛋白激發(fā)光源，如希望提供更多詳細信息耍属，可直接聯(lián)系上海路陽生物技術有限公司的銷售客服托嚣。.

本文圖片版權歸屬上海路陽儀器有限公司