GFP熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用案例
熒光蛋白激發(fā)光源應(yīng)用于植物和動物研究實驗室惠啄，為廣大動植物研究的科研工作者帶來了諸多的便利，以下為熒光蛋白激發(fā)光源常見應(yīng)用：
1撵渡、有時候，研究者們需要對小鼠的伏隔核進行穿孔趋距，以便進一步生化分析。如果能觀測到共轉(zhuǎn)染的熒光节腐，就能很容易找到正確的穿孔部位外盯。研究者們就可以用LUYOR-3260RB單熒光蛋白觀測手電筒來觀測熒光铜跑，從而找到正確穿孔位置的门怪。研究者從小鼠大腦中提取GFP標(biāo)記的背紋體锅纺。他們把這比喻成：從一個大一點的燕麥片中分離出一塊小的燕麥片，這是很困難的肋殴。但是他們用的單熒光蛋白觀測手電筒LUYOR-3430RB，就很容易看到大腦中的目標(biāo)區(qū)域护锤，從而讓解剖更準(zhǔn)確官地。
2烙懦、用LUYOR-3430RB單熒光蛋白觀測手電筒驱入，可以很快的檢測樣本是否染色（Alexa Fluor 488 Phalloidin標(biāo)記）成功氯析。
3亏较、用于結(jié)核分枝桿菌重組株的篩選掩缓，在結(jié)核分枝桿菌中成功構(gòu)建了高效同源重組系統(tǒng),利用該系統(tǒng)構(gòu)建了rv1364c、pstP跨膜區(qū)你辣、pstP胞外區(qū)三個突變株,得到雙交換突變株的效率為25％ -62.5％,從雙交換突變株得到無痕缺失突變株的效率為100％.通過gfp作為熒光標(biāo)記基因,利用LUYOR-3430RB GFP激發(fā)光源和LUV-30A熒光觀測眼鏡,可以對平板上的基因缺失株直接進行快速判定尘执。
熒光蛋白激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時，用LUV-30A黃色濾光鏡觀測誊锭，可檢測含綠色熒光蛋白（GFP）的生物；激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時弥锄，用LUV-50A紅色濾光鏡觀測，可檢測含紅色熒光蛋白（DsRed）的生物叉讥。更多熒光蛋白激發(fā)光源用于檢測、篩選轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）和紅色熒光蛋白（DsRed）基因的植物图仓、動物及微生物，如水稻救崔、玉米惶看、斑馬魚六孵、小鼠、細(xì)：菌劫窒、真菌等等本今，請咨詢上海峰志儀器有限公司主巍。
RFP熒光蛋白在老鼠上的表達
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GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用
GFP激發(fā)光源在細(xì)胞生物學(xué)的應(yīng)用具有易于檢測、熒光穩(wěn)定恳啥、廣譜性偏灿、易于載體構(gòu)建钝的、無毒害諸多優(yōu)點铆遭，因為在生物學(xué)應(yīng)用廣泛，上海峰志儀器有限公司銷售的GFP激發(fā)光源為你簡單整理10個應(yīng)用：
1沿猜、對細(xì)胞生理過程監(jiān)控
通過基因操作枚荣，蛋白與不同GFP進行融合啼肩，形成融合蛋白橄妆。通過融合蛋白在激發(fā)光源的照射下發(fā)出熒光特制祈坠，可以對相應(yīng)蛋白的表達和轉(zhuǎn)運以及生理反應(yīng)進行監(jiān)控害碾。監(jiān)控主要有：轉(zhuǎn)移和定位、GFP光譜的生化修飾赦拘、熒光共振的能量轉(zhuǎn)移慌随。
2、細(xì)胞篩選
基于GFP能夠吸收并在激發(fā)光源照射下發(fā)出熒光阁猜，并且熒光穩(wěn)定以及檢測方法快速、方便的特性剃袍，GFP在細(xì)胞篩選上廣泛應(yīng)用。如：應(yīng)用流失細(xì)胞計數(shù)儀來篩選蛋白產(chǎn)量增強的細(xì)胞捎谨；使用GFP作為標(biāo)記快速篩選出在生長抑制環(huán)境下仍能保持重組蛋白大量表達的CHO細(xì)胞；通過GFP熒光的減少研铆，可以檢測出鼠和人細(xì)胞的凋亡；利用GFP融合細(xì)胞作為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記，通過篩選已經(jīng)獲得GFP表達的E.coli凶赁、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞燈特殊類型。
3虱肄、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)及蛋白質(zhì)分子的定位
相對于以前使用細(xì)胞分級分離和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)研究蛋白質(zhì)移位，現(xiàn)在使用GFP融合蛋白顯像技術(shù)更簡便且可靠咏窿，既能更快又能更全面的對蛋白質(zhì)的移動進行研究斟或。如：對幾個GFP突變體的檢定集嵌，通過激發(fā)光源激發(fā)不同熒光萝挤，從而在活細(xì)胞中準(zhǔn)備的區(qū)分多種不同熒光融合蛋白并了解他們的分布情況御毅。
4、用于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的動力學(xué)研究
研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)主要有：光漂白熒光恢復(fù)法（FRAP）端蛆、光漂白熒光損失法(FLIP)。FRAP主要是通過對細(xì)胞內(nèi)特定的點或區(qū)域進行強烈的光照今豆，使熒光發(fā)生光跑白作用，再通過相同時間間隔的光影像采樣記錄下熒光恢復(fù)的動力學(xué)過程柔袁。FLIP是對細(xì)胞的一個區(qū)域進行持續(xù)性的光漂白呆躲，再對光漂白區(qū)外的熒光的損失進行監(jiān)控就可獲得一些標(biāo)記蛋白之間的相關(guān)性信息。另外一種可以用來研究細(xì)胞內(nèi)返傭動力學(xué)的方法就是熒光相關(guān)性分光光鏡檢查捶索。
5插掂、計算細(xì)胞生長速度
在高水平組合型表達GFP的細(xì)胞品系中，在細(xì)胞生長的對數(shù)期情组。綠色熒光蛋白激發(fā)后所發(fā)出的熒光信號與細(xì)胞的數(shù)量密切相關(guān)。測量到的任何熒光強度都可以相應(yīng)地轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)胞濃度肆氓。盡管在細(xì)胞生長的后期，用熒光信號計算得到的細(xì)胞數(shù)目略低于培養(yǎng)物種的實際數(shù)目谢揪。但在常用的臺盼藍(lán)技術(shù)方法中，這些誤差是允許的捐凭。利用這一技術(shù)，可以測定某些細(xì)胞的分布和生長狀況茁肠，尤其是一些透明的動植物組織內(nèi)特定細(xì)胞、化合物的生長垦梆、分布情況匹颤。也有人用此項技術(shù)進行病毒在植物體內(nèi)的生長、擴散情況的研究托猩，取得了不錯的效果印蓖。
6、觀察細(xì)胞內(nèi)酶的活動
GFP不僅可以用來探測融合蛋白的空間定位京腥，而且可以對活細(xì)胞的酶活動赦肃，如：磷酸化作用、蛋白水解作用燈進行報告，還可測量與酶活動相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)的pH他宛、cAMP船侧、Ca2+濃度。通過將外源系列插曲GFP基因中堕汞，可以對細(xì)胞內(nèi)酶的活動進行觀察以及了解這些酶的生理學(xué)參數(shù)勺爱。插入外源基因后所表達的融合蛋白中的GFP蛋白發(fā)色基團會發(fā)生構(gòu)像改變，其發(fā)射的熒光的強度發(fā)生很大的變化讯检。這些指示劑可以用來檢測細(xì)胞內(nèi)許多酶的作用琐鲁。例如：蛋白水解酶、激酶人灼、氧化還原酶以及一些小配基的濃度围段。
7、用于細(xì)胞示蹤實驗研究
利用GFP的激發(fā)后發(fā)出熒光可以清楚地對腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移進行追蹤投放。體內(nèi)腫瘤侵襲的研究要求在周圍正常細(xì)胞背景下奈泪，能識別少量甚至是單個的瘤細(xì)胞。
8灸芳、基因表達調(diào)控
GFP作為一種活體報告蛋白涝桅，用于研究基因表達的調(diào)控，易于會提觀測和檢測烙样。
9冯遂、定量分析
GFP的熒光強度很高，很容易用一起定量檢測谒获，而且研究表明GFP的熒光強度與其相連的細(xì)胞或蛋白有一定的相關(guān)性蛤肌，只需要作出一條相關(guān)性曲線，就可以對研究隊形進行定量的分析批狱。
10裸准、DFP報告蛋白用于細(xì)胞活體分離與純化
利用細(xì)胞表面標(biāo)記，通過流體細(xì)胞分光光度計或熒光活化細(xì)胞篩選儀可以分離與純化特殊類型細(xì)胞赔硫，對分析cDNA文庫炒俱、研究基因的細(xì)胞發(fā)育或組織專一性表達十分重要。利用GFP融合蛋白為細(xì)胞表面活體熒光標(biāo)記爪膊，通過篩選已經(jīng)獲得GFP的表達的大腸桿菌向胡、人體腎細(xì)胞和猿猴COS-1細(xì)胞特殊類型。
上海峰志儀器有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)各種熒光蛋白激發(fā)光源（GFP惊完、eGFP、BFP处硬、CFP小槐、YFP、RFP、Dsred凿跳、Mcherry）件豌，能夠觀測綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白控嗜、紅色熒光蛋白等在種子茧彤、愈傷組織、葉片等上的表達疆栏，便攜式GFP激發(fā)光源能夠在實驗室曾掂、溫室大棚、試驗田等地方直接觀測熒光蛋白的表達壁顶，請根據(jù)網(wǎng)頁底部聯(lián)系方式聯(lián)系：138-1868-3556珠洗，聯(lián)系人：張小姐。
熒光蛋白GFP的應(yīng)用
熒光蛋白GFP在激發(fā)光源的照射下若专，人眼能明顯的看到熒光许蓖，而一起被廣泛應(yīng)用于各種生物研究，主要特性如下
1调衰、易于檢測
GFP熒光反應(yīng)不需外加任何反應(yīng)底物膊爪，酶或其他共反應(yīng)銀子，也就不存在這些物質(zhì)可能難于進入細(xì)胞的問題嚎莉，只需紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)米酬，即可發(fā)出綠色熒光，GFP發(fā)射的熒光用LUV-30A熒光觀測眼鏡或用熒光顯微鏡就可以檢測到萝喘。靈敏度高淮逻，對于單細(xì)胞水平的表達也可識別，同時還可利用其進行定量檢測阁簸。由于GFP對活細(xì)胞基本無毒害爬早，因此無需特殊處理就可以很方便進行活體觀察。而且启妹，具有不同光譜特性的GFP突變體的獲得筛严，使在同一細(xì)胞中同時分析兩種不同蛋白或啟動子成為可能，可以用于法語細(xì)胞學(xué)饶米、藥物篩選桨啃、分析診斷燈研究。這就使GFP有可能成為一種快速檬输、簡便照瘾、經(jīng)濟的標(biāo)記蛋白，GFP基因作為報道基因有很廣泛的應(yīng)用丧慈。
2析命、熒光穩(wěn)定
GFP無光漂白現(xiàn)象主卫，在很大PH范圍內(nèi)（PH7-12）都可以正常發(fā)出熒光，手溫度的影響也很小鹃愤，只有在超過65℃時才會變性簇搅，即熒光消失。熒光顯微鏡強光照射下软吐，GFP抗光漂白能力比熒光素強瘩将，特別是在450~490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定，單在340-390nm或395-440nm范圍內(nèi)凹耙，仍會發(fā)生光漂白現(xiàn)象姿现。對于長時間光照，GFP也有很好的耐受性使兔，根據(jù)Sheen等的研究建钥，GFP在受體內(nèi)表達時可以持續(xù)得到不低于10min的熒光。
3虐沥、廣譜性
首先表現(xiàn)在它的表達幾乎不受種屬范圍的限制熊经，在微生物、植物欲险、動物中都獲得了成功的表達镐依；其次就是沒有細(xì)胞種類和位置的限制，在各個部位都可以表達天试，在紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下發(fā)出肉眼可見的熒光槐壳。
4、易于載體構(gòu)建
由于GFP較小喜每，只含有238個氨基酸务唐，編碼GFP的基因序列也比較短，約2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起構(gòu)建多種質(zhì)粒带兜，而不至于使質(zhì)粒過大影響轉(zhuǎn)化頻率枫笛。盡管野生型的GFP在某些植物和動物中表達很弱，但是可以通過更換GFP生色團氨基酸改變堿基組分刚照、出去內(nèi)含子刑巧、更換強啟動子燈方法加強表達。Connack等篩選出三種含Ser65突變的突變體无畔，在大腸桿菌中表達時啊楚，紫外線光或藍(lán)光激發(fā)光源激發(fā)下的熒光強度比野生型高約100倍。
5浑彰、無毒害
Chalfie等的研究表明：GFP對生活細(xì)胞基本無毒害恭理，Sheen等的研究進一步表明：在玉米中，即便GFP在細(xì)胞中的表達量很高時郭变，對細(xì)胞也不會產(chǎn)生明顯毒害蚯斯，但是至今我們還不了解它對植物再生能力的影響薄风。
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