紫外交聯(lián)儀用于PCR樣品制備中消除擴(kuò)增子

紫外交聯(lián)儀用于PCR樣品制備過(guò)程中消除擴(kuò)增子 

紫外波長(zhǎng)（nm）一般選擇254nm队伟，照射30min即可穴吹。需要注意的是，選擇UV作為消除殘留PCR產(chǎn)物污染時(shí)嗜侮，要考慮PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度與產(chǎn)物序列中堿基的分布港令，UV照射僅對(duì)500bp以上長(zhǎng)片段有效，對(duì)短片段效果不大锈颗。UV照射時(shí)顷霹，PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會(huì)形成二聚體，這些二聚體可使延伸終止击吱，但并不是DNA鏈中嘧啶均能形成二聚體淋淀，且UV照射還可使二聚體斷裂。形成二聚體的程度取決于UV波長(zhǎng)覆醇，嘧啶二聚體的類(lèi)型及與二聚體位點(diǎn)相鄰核苷酸的序列朵纷。在受照射的長(zhǎng)DNA鏈上，形成二聚體缺陷的數(shù)量少于0.065/堿基永脓，其他非二聚體的光照損傷（如環(huán)丁烷型嘧啶復(fù)合體袍辞，胸腺嘧啶乙二醇，DNA鏈間與鏈內(nèi)的交聯(lián)和DNA斷裂等）均可終止Taq DNA聚合酶的延伸常摧。這些位點(diǎn)的數(shù)量與二聚體位點(diǎn)相當(dāng)搅吁。如果這些位點(diǎn)（0.13/堿基）在DNA分子上隨機(jī)分布，一個(gè)500bp片段的DNA分子鏈上將有32處損傷位點(diǎn)落午，那么谎懦，105個(gè)這樣的分子中每個(gè)分子中會(huì)至少有一處損傷。相反溃斋，如果100bp的片段界拦，每條鏈上僅有6處損傷，105個(gè)拷貝分子中將有許多分子沒(méi)有任何損傷盐类。這就是UV照射有一定的片段長(zhǎng)度限制的原因寞奸。