薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)中紫外線燈怎么操作？

薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)中紫外線燈怎么操作？

在進(jìn)行薄層色譜TLC實(shí)驗(yàn)時(shí)滥酥，操作紫外線燈時(shí)要佩戴好LUV-40紫外線防護(hù)面罩更舞，因?yàn)槟鉚LC試驗(yàn)用的都是雙波長(zhǎng)紫外線燈，短波對(duì)皮膚很眼睛傷害特大坎吻，長(zhǎng)波對(duì)眼睛傷害很大缆蝉，不做防護(hù)臉部皮膚會(huì)起泡和紅腫，眼睛會(huì)造成玻璃體混濁瘦真，視力下降刊头。

先將LEAC-280L紫外線燈電源插上，選擇打開需要照射的波長(zhǎng)開關(guān)诸尽，把跑膠板放在紫外線燈下面照射即可原杂。如果有LCM-26紫外線觀察箱，在紫外線觀察箱里面觀察效果會(huì)更好您机。

薄層色譜（TLC）是一種非常有用的跟蹤反應(yīng)的手段穿肄，還可以用于柱色譜分離中合適溶劑的選擇。薄層色譜常用的固定相有氧化鋁或硅膠往产。流動(dòng)相則是一種極性待選的溶劑被碗。將溶液中的反應(yīng)混合物點(diǎn)在薄板上某宪，然后利用毛細(xì)作用使溶劑（或混合溶劑）沿板向上移動(dòng)進(jìn)行展開仿村。根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會(huì)在薄板上移動(dòng)不同的距離兴喂。極性強(qiáng)的化合物會(huì)“粘”在極性的硅膠上蔼囊，在薄板上移動(dòng)的距離比較短焚志。而非極性的物質(zhì)將會(huì)在流動(dòng)的溶劑相中保留較長(zhǎng)的時(shí)間從而在板上移動(dòng)較大的距離∥饭模化合物移動(dòng)的距離大小用Rf值來表達(dá)酱酬。這是一個(gè)位于0～1之間的數(shù)值，它的定義為：化合物距離基線（先點(diǎn)樣時(shí)已經(jīng)確定）的距離除以溶劑的前鋒距離基線的距離云矫。

薄層色譜（TLC）實(shí)驗(yàn)步驟：

1膳沽、切割薄板。通常让禀，買來的硅膠板都是方形的玻璃板挑社，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前巡揍，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置（注意不要損壞硅膠面）痛阻。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割腮敌。當(dāng)整塊玻璃被切割后阱当，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨(dú)立的小塊了。（開始的時(shí)候糜工，也許你會(huì)感到有一些難度弊添，但經(jīng)過一些訓(xùn)練以后，你便會(huì)熟練地掌握該項(xiàng)技術(shù)捌木。）

2表箭、選取合適的溶劑體系∨チ化合物在薄板上移動(dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同免钻。在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數(shù)極性物質(zhì)不會(huì)移動(dòng)崔拥，但是非極性化合物會(huì)在薄板上移動(dòng)一定距離极舔。相反，極性溶劑通常會(huì)將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線链瓦。一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中的化合物都離開基線拆魏，但并不使化合物都到達(dá)溶劑前端，Rf值好在0.15~0.85之間慈俯。雖然這個(gè)條件不一定都能滿足渤刃，但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)（在柱色譜中，合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2~0.3之間）贴膘。那么卖子，應(yīng)該選取哪些溶劑呢？一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對(duì)極性列于如下：

強(qiáng)極性溶劑：

甲醇〉乙醇〉異丙醇

中等極性溶劑：

乙腈〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯

非極性溶劑：

環(huán)己烷刑峡，石油醚洋闽，己烷玄柠，戊烷

常用混合溶劑：

乙酸乙酯/己烷：常用濃度0~30%。但有時(shí)較難在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完全除去溶劑诫舅。

乙醚/戊烷體系：濃度為0~40%的比較常用羽利。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷：對(duì)強(qiáng)極性化合物5~30%比較合適刊懈。

二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%这弧，當(dāng)其他混合溶劑失敗時(shí)可以考慮使用。

3虚汛、將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開池中当宴，在展開池中放置一大塊濾紙。

4泽疆、將化合物在標(biāo)記過的基線處進(jìn)行點(diǎn)樣户矢。我們用的毛細(xì)管是買來的，此外殉疼，毛細(xì)管也可從加熱過的Pasteur吸管上拔下梯浪。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，一定要點(diǎn)上起始反應(yīng)物瓢娜、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物挂洛。

5、展開：讓溶劑向上展開約90%的薄板長(zhǎng)度眠砾。

6虏劲、從展開池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。根據(jù)這個(gè)計(jì)算Rf的數(shù)值褒颈。

7柒巫、讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。

8谷丸、用非破壞性技術(shù)觀察薄板堡掏。好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀察。將薄板放在紫外燈下刨疼，用鉛筆標(biāo)出有紫外活性的點(diǎn)泉唁。盡管在5.301中不用這種方法，但我們將采用另一常用的無損方法——用碘染色法揩慕。

9亭畜、用破壞性方式觀測(cè)薄板。當(dāng)化合物沒有紫外活性的時(shí)候迎卤，只能采用這種方法拴鸵。在各種TLC顯色劑的調(diào)配方法中，提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時(shí)宝踪，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中侨糟，確保從基線到溶劑前沿都被浸沒碍扔。用紙巾擦干薄板的背面瘩燥。將薄板放在加熱板上觀察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前不同，將薄板從加熱板上取下厉膀。

10、根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇二拐。如果想讓Rf變得更大一些服鹅，可使溶劑體系極性更強(qiáng)些；如果想讓Rf變小百新，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些企软。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了饭望。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析仗哨，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系铅辞。

11厌漂、做好TLC標(biāo)記，計(jì)算每個(gè)斑點(diǎn)的Rf值斟珊，并且在筆記本中畫出圖樣苇倡。