經(jīng)常有同學(xué)咨詢婚度,看到文獻(xiàn)里面很多熒光蛋白的照片非常漂亮蘸秘,不知道怎么拍攝,上海峰志儀器有限公司的技術(shù)工程師將熒光蛋白表達(dá)的拍攝方法給大家說一下蝗茁,供大家參考醋虏。
上圖:紅色熒光蛋白在愈傷上的表達(dá)
熒光蛋白表達(dá)的拍攝工具:
光源:光源用于激發(fā)熒光蛋白發(fā)出熒光,如果視野很大哮翘,建議購買LUYOR-3415系列GFP激發(fā)光源颈嚼,這款照射面積大,激發(fā)熒光亮度高饭寺,拍攝效果非常好阻课。
單反相機(jī):常規(guī)的單反相機(jī)均可。
拍照濾鏡:根據(jù)拍攝的熒光蛋白種類艰匙,要選擇合適的熒光蛋白拍照濾鏡限煞,拍照濾鏡是將激發(fā)光源的激發(fā)光過濾掉,讓熒光蛋白的熒光通過员凝,這樣單反相機(jī)就能呈現(xiàn)精美的熒光照片署驻。
暗室:因環(huán)境明亮光線,影響大熒光的拍攝健霹,拍攝周圍光線越暗旺上,拍攝效果約好,如果沒有暗室骤公,可以選擇夜晚拍攝。
熒光蛋白表達(dá)的拍攝技巧:
將單反相機(jī)檔位撥到手動檔位(M檔)扬跋,調(diào)整光圈阶捆、ISO、和快門速度三個參數(shù)到合適值。
將選擇好的熒光蛋白拍照濾鏡安裝到單反相機(jī)鏡頭上洒试。
將LUYOR-3415系列GFP激發(fā)光源安裝到臺式支架上倍奢,打開光源開關(guān)。
調(diào)整合適角度垒棋,相機(jī)對焦到拍攝目標(biāo)上卒煞,拍攝即可。
說明:
如果是拍攝葉片上的GFP或eGFP的表達(dá)叼架,葉片上的葉綠素在450nm激發(fā)光照射下會發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光畔裕,如果GFP或eGFP的表達(dá)量不高的話,會拍攝不到熒光蛋白的表達(dá)乖订,這時候建議不用LUV-495A拍照濾鏡扮饶,用LUV-520A綠色濾鏡拍攝,LUV-520A綠色濾鏡只允許綠色波段通過乍构,葉綠素?zé)晒獗桓綦x掉了甜无。