綠色熒光蛋白在分子和細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用越來越多。由于應(yīng)用的多樣性抡笼,已經(jīng)開發(fā)出形成原始野生型綠色熒光蛋白(wtGFP)的幾種變體苏揣。這些變體中的幾個(gè)具有與wtGFP不同的激發(fā)和發(fā)射光譜。為了在定量這些GFP時(shí)獲得zui大的靈敏度推姻,重要的是使用zui合適的激光光源平匈。在這里,我們表征了一些常用的GFP變體的激發(fā)和發(fā)射光譜藏古,并建議使用LUYOR-3410和LUYOR-3415便攜式熒光蛋白激發(fā)光源觀察增炭。
wtGFP蛋白zui常用的突變可分為三類:
(1)紅移變體;
(2)像變體一樣的野生型拧晕;
(3)發(fā)出藍(lán)色光的變體隙姿。如圖1所示,以EGFP為代表的紅移變體具有一個(gè)集中在約488 nm處的單個(gè)激發(fā)峰厂捞,發(fā)射峰波長(zhǎng)為509 nm输玷。類似野生型的變體的主要激發(fā)峰位于395 nm,發(fā)射峰位于509 nm靡馁,而發(fā)出藍(lán)色的突變體通常在380 nm附近有一個(gè)激發(fā)峰欲鹏,在460 nm附近有一個(gè)發(fā)射峰(圖1)。
表1. GFP變體的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)數(shù)據(jù)
GFP的變體 | 激發(fā)波長(zhǎng)EX (nm) | 發(fā)射波長(zhǎng)EM (nm) | LUYOR-3415對(duì)應(yīng)波段 |
wtGFP | 395 | 509 | UV |
GFPuV | 395 | 509 | UV |
Stemmer | 395 | 509 | UV |
EGFP | 488 | 509 | RB |
GFP-S65T | 489 | 509 | RB |
Y66H | 382 | 459 | UV |
EBFP | 380 | 460 | UV |
LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源照射植物根系奈嘿,GFP在植物根系的表達(dá)
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