美國路陽UCL-3200/UCL-3500紫外交聯儀在Northern blotting皇型、Southern blotting诬烹、EMSA等尼龍膜、硝酸纖維素膜的交聯弃鸦、Sterilization(滅菌)绞吁、DNA Nicking(DNA缺失)的應用。
1.Membrane Blotting
美國路陽儀器設備有限公司UCL-3500系列紫外交聯儀可用于Northern唬格、Southern blotting家破、EMSA等膜交聯,當使用254 nm波長购岗、能量為120.0mJ/cm2交聯時汰聋,尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價鍵穩(wěn)定。
(1)將一張或兩張用轉移緩沖液(如10×SSC)輕輕潤濕的吸水紙放在UCL-3500系列紫外交聯儀的紫外輻照室喊积。將尼龍膜放在吸水紙上烹困,使附著核酸的一面朝上,使紫外線燈管能夠直接照射核酸乾吻。
(2)關閉UCL-3500系列紫外交聯儀的門髓梅。
(3)按下STAR(運行)按鍵啟動拟蜻,當紫外線燈管亮時,顯示屏將立即開始從輸入值開始累計枯饿。如果在曝光期間的任何點打開門酝锅,照射將停止,并顯示已曝光值奢方。(關上門按STAR按鍵繼續(xù)照射搔扁。)
(4)輻照完成后,蜂鳴器將鳴響約3–4秒袱巨。自動交聯大約需要25–50秒。
(5)取下尼龍膜并關上門碳抄,交聯完成愉老。每次使用后,清潔紫外線交儀紫外輻照室剖效,以清除殘留的鹽嫉入。
2.DNA Nicking
美國路陽儀器設備有限公司UCL-3200/UCL-3500紫外交聯儀也可用于切割溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠中的DNA,代替HCl洗滌液璧尸,瓊脂糖凝膠中比較大的DNA(>20kb)的轉模效率很低咒林,因此DNA在轉移到尼龍膜之前需要進行前處理。DNA可通過HCl或紫外線照射進行切割爷光。HCl脫嘌呤反應較難控制垫竞,且對溫度極為敏感。所以在轉移前蛀序,在短波長紫外光(254 nm)中80.0mJ/cm2切割DNA的方法更可靠欢瞪。
3.Sterilization(滅菌)
紫外線shajun就是通過紫外線照射,破壞及改變微生物的DNA(脫氧核糖核酸)結構徐裸,使細菌當即死亡或不能繁殖遣鼓,達到shajun的目的。真正具有shajun作用的是UVC紫外線重贺,因為C波段紫外線很容易被生物體的DNA吸收骑祟,尤其是254nm波長左右紫外線佳。紫外線shajun屬于純物理方法气笙,具有簡單便捷次企、光譜高效、無二次污染潜圃。因此在短波長紫外光(254 nm)中滅菌95sec抒巢。
4.RecA Screening(RecA篩選)
UCL-3200/UCL-3500紫外交聯儀也可用于篩選RecA突變體,在短波長紫外光(254 nm)中40.0mJ/cm2照射下秉犹,recA突變體阻止了紫外線誘導損傷的修復蛉谜,阻止了紫外照射過的過的recA細胞的生長稚晚。