熒光顯微鏡常用的激發(fā)光源

熒光顯微鏡常用LED激發(fā)光源特點

相對于一般的顯微鏡疾渣，熒光顯微鏡保留著顯微鏡功能的同時篡诽，還能進行熒光觀察，具有檢出能力強榴捡，能進行多重著色觀察的特點杈女，廣泛應用于生物醫(yī)學領域。而熒光照明光源是熒光顯微鏡的關鍵部件吊圾，作用至關重要达椰，既要考慮檢測樣本標記的熒光探針吸收光譜，同時又要考慮儀器的使用簡便性项乒。

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在LED前板丽，熒光顯微鏡常用光源為高壓汞燈，在LED激發(fā)光源普遍后趁尼，就成為熒光顯微鏡的主要光源埃碱。LED發(fā)射的單色光位于相對較窄的光譜帶中，半高寬約為10nm-40nm酥泞，相對于高壓汞燈砚殿，LED激發(fā)光源有幾個重要優(yōu)勢：

1）額定使用壽命可達3000小時以上，遠遠超過其他光源芝囤；

2）整個額定使用壽命期間似炎，其輸出強度保持相對穩(wěn)定，確保高效激發(fā)悯姊；

3）LED啟動和關閉時間短羡藐，即開即用，不需要預熱悯许；

4）LED光效高仆嗦，且亮度連續(xù)可調(diào)；

5）體積小先壕、輕便瘩扼，且為冷光源，彌補汞燈的大功率垃僚、發(fā)熱集绰、使用復雜燈問題，大大的降低了熒光顯微鏡使用成本并提高熒光顯微鏡操作的簡便性谆棺。

對于熒光顯微鏡來說栽燕，尤其是單色激發(fā)的熒光顯微鏡，LED具有非常大的吸引力，例如B波段激發(fā)的熒光探針FLTC/GFP標記的樣板纫谅，在藍光LED激發(fā)下了可以獲得非常好的圖像炫贤，而廣泛應用于免疫熒光檢測領域。上海峰志多波段LED顯微鏡熒光激發(fā)光源付秕，多波段LED光源可選兰珍，并可控制每一個LED的亮度，可以實現(xiàn)多波長的選擇激發(fā)询吴，便捷掠河、高效。

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熒光顯微鏡分析中常用激發(fā)光源的種類

在熒光分析中常用汞燈作激發(fā)光源唠摹，根據(jù)汞蒸氣壓的不同可分為：

低壓汞燈

汞蒸氣，可發(fā)射出很強波長的射線奉瘤，壽命很長勾拉，可長時間連續(xù)工作，射線對眼睛有害盗温，不眼睛時不可長時間注視藕赞。

高壓汞燈

高壓汞燈又叫高強度紫外線燈，汞蒸氣為1-數(shù)個大氣壓卖局，可見炮區(qū)的譜線增強斧蜕，在紫外光區(qū)，波長為365nm的光線zui強砚偶。

中壓汞燈

可以發(fā)射一系列汞線組成的不連續(xù)光譜批销，除254nm波長以外，多數(shù)譜線都可作為校正波長使用染坯。此外均芽，還有超高壓汞燈、汞-氙燈酒请、汞-鋅燈等骡技。

氫灑和氘燈

是燈泡中加氫蒸氣，經(jīng)閉合放電產(chǎn)生160-350nm波長的光羞反，氫朋激發(fā)態(tài)返回的基態(tài)時布朦，就發(fā)射了氫的連續(xù)光譜，在160nm以下為線樂譜昼窗，氫燈和氘燈性能相同是趴，其壽命也比氫燈長，因玻璃吸收紫外

線澄惊，故燈殼要用石英制作唆途，或在燈泡出光處開一石英窗富雅，此光源適用于紫外光區(qū)的測定。

氙燈

紫外線燈的光的輻射能強度很高肛搬，它可在220-1100nm之間發(fā)射很強的連續(xù)光譜没佑，可用于紫外區(qū)，可見光及近紅外區(qū)的測定温赔，雖其輻射范圍廣蛤奢，使用中在生產(chǎn)高熱的同晨有臭氧味，其壽命短陶贼，燈泡內(nèi)壓較大啤贩，如日立牌650-60型熒光分光光度計，氙燈平時約有7個大氣壓拜秧，點燃后可達30個大氣壓痹屹，故使用進應注意。

1枉氮、按裝緊固螺絲時用力應均勻志衍，勿成扭力，以免燈泡破裂爆炸聊替。

2足画、勿用手觸及燈泡，以防受熱不均破裂佃牛。

3、如紫外線燈泡有油污医舆，應用雞皮藮酒精輕擦俘侠，不能用布、棉花等物擦拭蔬将。

熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式有哪些

熒光顯微鏡是科研爷速、病理、檢驗等部門常用的醫(yī)用光學儀器之一霞怀。因為普通的顯微鏡是在明亮的背景上觀察暗物惫东，而熒光顯微鏡是在暗背景下觀察彩色的圖像，因此它比普通的顯微鏡分辨力提高100倍毙石，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節(jié)廉沮。但是它的調(diào)整，校正難度較高徐矩，只要解決了熒光顯微鏡的問題滞时，其它顯微鏡問題就迎刃而解。

激發(fā)光源是熒光顯微鏡主要組成部分滤灯，熒光顯微鏡都采用200W的超高壓汞燈作激發(fā)光源坪稽。它是由石英玻璃制作曼玩，中間呈球形，內(nèi)充有一定量的汞窒百，工作時在兩極間放電黍判，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高篙梢，當水銀完全蒸發(fā)時顷帖，可達50～70個標準大氣壓力，這一過程一般約5～15min庭猩。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子在不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結果窟她。它發(fā)射很強的紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)蔼水，因此被熒光顯微鏡普遍采用震糖。

熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學的基本工具。它是由超高壓光源趴腋、濾片系統(tǒng)(包括激發(fā)和壓制濾板)吊说、光學系統(tǒng)和攝影系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光优炬。

熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式：
按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種颁井。

UV激發(fā)法是用短于400nm紫外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光蠢护，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光雅宾，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

BV激發(fā)法是以404nm葵硕、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)眉抬。該方法使用藍光照射標本，所以熒光顯微鏡的截止濾光片必須使用可完全阻斷藍光并可充分通過所需綠懈凹、黃熒光的濾光片蜀变。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發(fā)光的極大吸收波長和熒光的極大發(fā)光波長比較接近介评，所以BV激發(fā)法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片库北。該法可用藍光作為激發(fā)光，所以熒光色素的吸收效率較高们陆，可得到較明亮的圖像寒瓦。其缺點是500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上的使整個圖像顯黃色坪仇。在熒光抗體法中孵构，大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時烟很，上述BV激發(fā)法的缺點往往影響極大颈墅。

上圖為LUYOR-3420RG體視顯微鏡用熒光激發(fā)光源（更多產(chǎn)品介紹）

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